Immunodiagnosis bakış
1. Temel konsept
(1) antikorlar (Ab) ve antigens (Ag)
Antikor: bu anlamına gelir koruyucu proteini vücut tarafından üretilen nedeniyle antijen stimülasyon, tarafından salgılanan efektör B hücreleri omurgalı, hangi ayrılabilir IgG, IgM, IgA, igD, ve IgE. IgG olduğunu isotype ile en yüksek içeriği serum ve vücut sıvıları, muhasebe için 75% için 80%. IgG birincil ikincil tarafından üretilen antikor bağışıklık tepki, "Ana kuvvet" vücudun anti-enfeksiyon, immunodiagnosis içinde ve en antikor kullanılır.
Antijen: bu bir madde anlamına gelir bu antikorlar ve herhangi bir madde üretimi neden olabilir neden olabilir bir bağışıklık vücutta tepki. Antigens vardır dış, makromoleküler, ve özel. , Özgüllük bir antijen anlamına gelir bir antijen antikor ilgili sadece bind veya efektör T hücreleri, hangi kimyasal grup molekül yüzey üzerinde belirlemek, denilen antigenic belirleyicileri. Moleküler ağırlığı antijen genellikle> 10kDa olduğunu, ve daha büyük molekül ağırlığı, güçlü antigenicity.
(2) Polyclonal antikorlar ve monoklonal antikorlar
Polyclonal antikor: doğal antijen molekülleri sık sık farklı çeşitli içerir antigenic epitopes, vücudun bağışıklık uyarıcı sistemi ile bu antijen B çeşitli etkinleştirebilirsiniz cep klonlar aynı zaman, ve elde edilen antikorlar olacak farklı epitopes karşı antikorlar çeşitli içerir, böylece onlar denir polyclonal antikorlar.
, Monoklonal antikor son derece homojen antikor tarafından üretilen bir tek B cep klon sadece hedefleri belirli bir epitope. Genellikle hazırlanan hybridoma teknolojisi kullanarak. Efektör B hücreleri ve miyelom hücreleri kaynaşmış formu B cep hybridomas vardır. Bir monoklonal antikor üretebilir kültürleme tarafından bir tek hybridoma cep içine bir nüfus hücrelerin için belirli bir epitope. Afinite ve özgüllük of monoklonal antikorlar genellikle daha iyi daha polyclonal antikorlar.
(3) rekombinant antikorlar ve rekombinant antigens
Rekombinant antikor: bir genetik mühendislik antikor bir antikor vitro üretilen kullanarak gen rekombinasyon teknolojisi ve protein mühendislik teknolojisi. Gen dizisi elde antikor, inşa ifadesi bir vektör, ve içine aktarmak ifadesi bir ev sahibi (gibi maya, böcek hücreleri, memeli hücreleri, veya bakteri). Bu şekilde, antikorlar üretimi bağışıklık sistemi kısıtlamaları kurtulmuş olduğunu. Aynı zamanda, hem tam uzunlukta antikorlar ve çeşitli antikor parçaları üretebilir.
Rekombinant antigens: genellikle,, rekombinant antigens bakın rekombinant proteinlerin özü ve aynı zamanda üretilen proteinler tarafından vitro gen rekombinasyon teknolojisi ve protein mühendislik teknolojisi.
2. immunodiagnosis İlkeleri
(1) yöntemi çift monoklonal antikor sandviç
Çift monoklonal antikor sandviç yöntemi: kullanımı bir katı faz taşıyıcı için coat bir antikor ve etiket başka etiketli antikor antijen tespit etmek için olmak test, ve daha sonra formu bir kompleksi kaplı Ab-Ag-etiketli Ab. Bu yöntem özellikle algılar antigenic maddeler.
Görüntü kredi: https://www.rockland.com/resources/elisa-technique/
(2) dolaylı yöntemi
Dolaylı yöntemi: bir algılama yöntemi hangi bir katı-faz taşıyıcı antijen ve etiket ikincil hareketsiz için kullanılır antikor. Bu yöntemi tespit ağırlıklı IgG antikorlar içinde örnekleri. Karmaşık bir kaplanmış Ag-hedef Ab-etiketli ikincil Ab oluşturulur içinde antikor tespit etmek için örnek.
Görüntü kredi: https://www.rockland.com/resources/elisa-technique/
(3) yakalama yöntemi
Yakalama yöntemi: bir algılama yöntemi hangi bir katı-faz taşıyıcı ceket ikincil antikor ve başka bir zorlanma için kullanılır etiketli antijen antikor tespit etmek için. Karmaşık bir kaplanmış ikincil Ab-hedef Ab-etiketli Ag oluşturulur ve test. Bu yöntem özellikle örnek IgM tespit etmek için kullanılır.
Görüntü kredi: https://www.rockland.com/resources/elisa-technique/
(4) rekabet yöntemi
Rekabet yöntemi: rekabetçi kaplanmış bağlama/etiketli etiketli ile antikor/kaplamalı antijen ve test antijen. Bu yöntemi tespit ağırlıklı küçük molekül antigens.
Görüntü kredi: https://www.rockland.com/resources/elisa-technique/
Yöntem 1: ceket antikor üzerinde katı faz, etiket antijen, örnek ekleyin,, test edilecek antijen antikor için yarışıyor bağlama sitesi, yıkama, çıkış sonuç
Yöntem 2: ceket antijen üzerinde katı faz, etiket antikor
3. immunodiagnosis gelişimi
Immunodiagnosis geçerlidir İmmünoloji teorileri, teknikleri, ve teşhis için çeşitli hastalıklar ve belirlemek bağışıklık durumu anlamına gelir. Teknoloji geliştirme ile, immunodiagnosis uğramıştır immunoelectrophoresis, yağış ve aglütinasyon tahliller, radioimmunoassay, immunofluorescence, enzim-bağlantılı immunosorbent deneyi, immunoturbidimetry, kolloidal altın ve floresan microsphere etiketleme, lekeleme membran şeritler, chemiluminescence, protein cips, mikroakiskan kontrol teknolojisi ve tek-molekül algılama.
(1) enzim-bağlantılı immunosorbent deneyi (ELISA)
Enzim-bağlantılı immunosorbent deneyi (ELISA) bir algılama yöntemi birleştiren bağışıklık reaksiyon prensibi ile immobilizasyon teknolojisi ve enzim etiketleme teknolojisi. Ilk, kullanımı bir polistiren çok iyi plaka ceket antijen/antikor, örnek test edilecek madde bağlamak, ve eklemek horseradish peroxidase (HRP) veya alkalin phosphatase (AP) sonra yıkama etiketlemek için antikor/antijen oluşturmak için bir bağışıklık karmaşık. Daha sonra eklemek bir enzimatik reaksiyon kromojenik substrat ve sonlandırmak için bir durak çözüm. Son olarak, niteliksel veya kantitatif belirlemek örnek içeriği tarafından analit renk OD.
Görüntü kredi: https://www.biotekchina.com.cn/uygulamalar/elisa-and-related-immunoassays.html
(2) kolloidal altın/floresan immunochromatography
Kolloidal altın: altın ile sol bakın dağılmış faz parçacık çapı 1 ve 150 nm arasında, ve renk turuncu-kırmızı mor-kırmızı.
Kolloidal altın immunochromatography: bir algılama tekniği kullanan kolloidal altın-etiketli antikor, kullanım nitroselüloz membran (NC membran) olarak bir katı faz taşıyıcı için ceket antijen/antikor, ve kullanır kılcal eylem NC membran kromatografi için bir ucunu sıvı membran için diğer ucu, aynı zamanda, Bir bağışıklık kromatografi sırasında reaksiyon oluşursa.
Floresan immunochromatography: bir immunochromatographic algılama teknolojisi değiştirir kolloidal altın floresan içine microsphere etiketleme.
Görüntü kredi: https://www.researchgate.net/figure/A-The-composition-of-colloidal-gold-test-strip-B-Principle-of-the-CG-test-strip_fig5_340176469
(3) Chemiluminescence immunoassay
Chemiluminescence: ışık emisyonu anlamına gelir eşlik sürecinde kimyasal reaksiyonlar.
Chemiluminescence immunoassay yöntemi: bir algılama tekniği kullanan çok iyi plaka veya manyetik parçacıklar olarak katı taşıyıcılar için ceket antijen/antikor, analit ve luminophore eklemek için etiket antijen/antikor bağışıklık oluşturmak karmaşık, sonra yıkama, kimyasal teşvik karmaşık veya substrat için ışık yayarlar, lüminesans tarafından analit ve içeriği belirler yoğunluğu.
Görüntü kredi: https://www.sepmag. Ab/blog/teklif/335317/-iki-anahtar-nedenlerle-seçilmesi için-chemiluminescence-için-immunoassays
(4) chemiluminescence sınıflandırılması immunoassay
Sınıflandırma kaplama ile taşıyıcı: bu ayrılmıştır plaka chemiluminescence ve manyetik parçacık chemiluminescence. Şu anda, plaka chemiluminescence elimine edilmiştir.
Lüminesans tarafından sınıflandırma: dolaylı ayrılmıştır lüminesans (enzimatik), doğrudan lüminesans (akridin ester, luminol), ve electrochemiluminescence.
